Studie IHC - pomoc při luštění biologii rakoviny prsu

Navzdory tomu, že stále více a více kliniky začínají používat metody genetického fenotypizaci nádorů IHC studie, kterou je dodnes hlavním nástrojem v rozluštění biologii rakoviny prsu, předpovídat jeho budoucí vývoj, „předpovědět“ odpovědi nádoru na plánovanou léčbu.

V tomto článku se dozvíte, co je imunohistochemická (IHC) studie, význam IHC má rakovinu prsu.

Histochemie (sekce v histologické barvení)

Před patolog (morfologie) začíná pod mikroskopem část prsní tkáně získaného biopsií, je třeba barvit jeho speciální barviva.

Histochemické použitých barviv na tenké části místa tkáně vidět pod mikroskopem, buňky, které jsou přítomny tam, jejich uspořádání ve vztahu k sobě navzájem (struktura tkáně). Světelná mikroskopie je rutinní metodou pro studium obarvených tkáňové řezy, široce používané v diagnostice rakoviny prsu. Nejběžnější sekce barvení tkáně za použití:

• Hematoxylin - to barví jádro buněk v tmavě modré barvě;
• Eosin - což růžové cytoplazmy buněk. jejich sdílení s hematoxylin-eosinem nazývá barvení.

Co je imunohistochemie (IHC)

Patolog - lékař, který už dlouho studoval na Lékařské univerzitě, vědět, jak používat mikroskopu rozlišit barevného rakovinné buňky úseky od normální tkáně. Obvykle se diagnóza (benigní nebo maligní patologie) postačí uvažovat pod mikroskopem tkáňových řezech obarvených hematoxylinem a eosinem. Ale někdy to nestačí. V této situaci, je podpora je imunohistochemie, které morfologické identifikaci buněk a tkání přidává imunologickou složkou.

Metoda imunohistochemie (IHC) detekce morfologických doplňků buněk a tkání s použitím protilátek proti známým antigenům, které jsou specifické pro určité typy buněk nebo buněčných složek. Umístění těchto protilátek je možné vidět použití světelné mikroskopie, protože protilátky obsahují vizuálně rozpoznat značku.

První analýza technikou imunohistochemické karcinomu prsu s použitím protilátek s připojenými fluorescenčními značkami, které vyžaduje použití speciálního fluorescenčním mikroskopem, což umožňuje lokalizaci těchto protilátek viz řez v prsní tkáni.

V průběhu posledních 30 let se výrazně zjednodušit postup, který se používá pro výzkum rakoviny prsu IHC za použití specifických protilátek (monoklonální protilátka) se enzymatické značky. Toto, podle pořadí, dovolil použití světelného mikroskopu s výzkumem imunohistologická rakoviny prsu, což je mnohem levnější, a tedy dostupnější. Nicméně, radioaktivní prvky (peroxidázu, alkalickou fosfatázu, a fluorescein), bez které někdy nevyžadují speciální techniky a je ještě široce používán.

Nutnost použití imunohistochemie u karcinomu prsu, kontrolovat jeho kvalita a interpretace výsledků by měly být sledovány oddělení patologie. Je důležité, že údaje získané při dekódování studie IHC použít pouze ve spojení s morfologickou analýzu prsní tkáně, získané barvení hematoxylinem a eosinem.

Dnes imunohistochemie u karcinomu prsu je nejvíce rutinní metodou v morfologických (histopatologických) laboratoře a použity pro diagnostiku a prognostické účely, jako prediktivní (prediktivní) ukazatel se chovají jako rakoviny prsu v budoucnosti.

Diagnóza rakoviny prsu a IHC

Když patolog vidí pod mikroskopem bioptického materiálu, je konfrontován se dvěma základními diagnostickými úkoly: určit původ nádorových buněk, kde byly (v kanálech, v lalůčků, nebo v jiných částech prsu) a potvrzení nebo vyloučení jejich invazi do sousední tkáně.

Diagnostické IHC markery používané pro rakovinu prsu

Z prvních dnech používání v onkologii IHC byla provedena hledání nových a vylepšených metod použít existující protilátky, které by mohly identifikaci buněk antigeny s vysokou specifitou a citlivostí. Tyto markery IHC jsou nyní široce používán objasnit histopatologickým diagnózu rakoviny prsu:

cytokeratiny

• CK5, CK10, CK14 a CK17 jsou cytokeratin bazální vrstvou epitelu, myoepitel exprimován.
• CK5 / 6 nebo „bazální cytokeratiny“ pomoci určit normální prsní myoepitel stejně jako laminární (sekretující).
• 34 12: protilátka pomáhá rozpoznat cytokeratiny 1, 5, 10 a 14.

Markery hladkého svalstva

• H-caldesmon. To lze nalézt pouze v prsu duktálních myoepitel, tak to má vysokou specifitu.
• Aktin hladkého svalstva (SMA). Tato protilátka pomáhá detekci aktin v mikrofilamentah- nízkou specifičností, protože SMA je detekován ve fibroblastech (v tkáních, které byly regenerovány).
• Myosin těžkého řetězce hladkého svalstva (SMMHC) - konstrukční prvek v hladkého svalstva myozin izoformy SM2. Vyjádřeno Myoepiteliální prsu, má vysokou citlivost a specifičnost, jako SMMHC přítomen pouze v myoepitel uspořádaných v kanálech a lalůčků mléčné žlázy, ale ne ve fibroblastech pojivové tkáně žlázy.
• Calponin - polypeptid 34 kDa, moduluje aktivitu actomyosin. Dobrá citlivost, ale je přítomen v prsních fibroblastech pojivové tkáně.
• P63-p53 homolog - jaderný marker je velmi citlivé myoepitel.
• CALLA: Endopeptid, která se vyjadřuje v myoepitel.
• P-cadheriadhezivní molekula buňky s vysokou citlivostí na myoepiteliální buněk normální prsní tkáně, - n. To nereaguje s fibroblasty.

jiné značky

• E-cadherin - buněčná adhezní molekula. To se používá k odlišení duktální karcinom „v suti“ (DCIS) v lobulární. Karcinom „v suti“ (LCIS) - DCIS, obvykle identifikovány barvením membrány, na rozdíl od LCIS, ve kterých není.
• markery melanomu: S100, Melan-A, HMB45.
• markery lymfocytů: CD20, LCA, CD15, CD30.
• vaskulární endoteliální markery: CD31, CD34, faktor VIII, d2-40 (podoplanin).
• markery buněčné proliferace: Ki67, MIB-1, PPh3.
• apoptóza markery: Bcl-2 a Bax, Bcl-X.

Příklady použití IHC řešit problémy se vyskytly při stanovení prsu patologie

Existuje mnoho situací, ve kterých imunohistochemie přispívá k formulaci konečného histopatologické diagnózy v mateřském patologie:

• Barvení e-cadherin buněčné membrány odstraňuje lobulární neoplazie (ALH) a LCIS. Nedostatek barvení buněčné membrány upřednostňuje lobulární nádory.
• Normální epiteliální hyperplazie, epitelu atypie nebo ten či onen DCIS. V benigní hyperplazie může detekovat reaktivitu na CK5 / 6 a CK14, zatímco s atypickou hyperplazie a DCIS ne.

Tento micro-invazivní karcinom, nebo něco jiného? Aplikační myoepitel markerů je rozhodující pro určení, zda se mikro-karcinom invazi (invazi laminární vrstvy v myoepitel). Reaktivita fibroblastů, že rozdíl v barvení buněk, Myoepiteliální barvení buněk hladkého svalstva cév může způsobit potíže při výkladu pozorovaného pod mikroskopem. Dvě značky myoepitel použité v této situaci, například, p63 a SMMHC nebo ASMA nebo calponin.

Co IHC markery jsou použity v diagnostických panelů patologii prsu

Sada markerů (diagnostický panel), který je používán v IHC studiích u karcinomu prsu, do značné míry závisí na vybavení laboratoře, ve které provádět imunohistochemie a zkušenostech lékaře provádějící ji. Níže jsou uvedeny doporučení, která IHC panel by měl být použity při prsu patologie, za předpokladu, jeden z kliniky:

• Myosin těžké řetězce hladkého svalstva (SMMHC) nebo calponin - citlivé a specifické markery do cytoplasmy myoepitel;
• Aktin hladkého svalstva může být použit, ale při výkladu je třeba mít na paměti, že je přítomen v fibroblastů (zánět a jizva);
• P63 je citlivý a specifický marker pro jader myoepithelial buněk barvených, ale může být přerušovaný. Použití markeru do cytoplasmy myoepithelial buněk, jako jsou SMMHC nebo calponin, by měly být použity, aby se zabránilo problémům ve výkladu obrazu získaného.

Při pokusu za účelem stanovení přítomnosti nebo nepřítomnosti myoepitel a p63 by měly být použity SMMHC nebo calponin.

Role imunohistochemie v definici „výhledová“ a „prediktivní“ faktory u karcinomu prsu

Prognostické faktory poskytují informace o možném chování karcinomu prsu v době diagnózy a jsou nezávislé na terapii. To znamená, že pomocí nich si můžete posoudit, jak se bude postupovat rychle a rakoviny, v uvedeném pořadí, v závislosti na tom, aby rozhodnout, kolik a zpracování přednost v každé situaci.

Na druhé straně, „prediktivní“ (predikovat) faktory, poskytnout informace, které poskytuje indikaci pravděpodobnosti odpovědi nádoru na konkrétní léčby. Navzdory tomu, že prognostické a prediktivní faktory se mohou uspořádat odděleně v diagnostice a klasifikaci karcinomu prsu častěji, že jsou oba prognostické a prediktivní.

Například přítomnost vysoké exprese HER2. V případě rakoviny prsu HER2 pozitivní (velké množství proteinu HER2 v nádoru), trvá agresivní, s počátkem metastázami do vzdálených orgánů. Avšak v případě, že nádor obsahuje malé množství tohoto proteinu (rakovina prsu HER2 negativní), nebude reagovat na použití cíleného léku Herceptin.

„Bazální“ IHC markery

K dispozici je divizí Rakovina prsu v závislosti na tom, které geny exprimují své buňky (profil genové exprese). Nádory profil, který je charakteristický pro bazální nebo myoepitel normálního prsu, ukáže přítomnost „bazální“ markery. Tyto nádory mají špatnou prognózu. Ve většině z těchto „bazální“ nádorů zcela chybí ER, PR (receptory estrogenu a progesteronu) a proteinu HER2. Oni často metastazovat do mozku, plic.

V současné době neexistuje shoda na imunohistochemickou profilu (IHC markerů, které by měly být aplikovány), který by jasně definovat „bazální“ kraby. Tyto nádory se špatnou prognózou zahrnuje takzvané „triple negativní karcinom prsu“, v němž není ER, PR a HER2, ale vyjádřené bazální cytokeratinům 5/6 a 14, epidermální růstový faktor (EGFR), a c-kit. Mohou také vyjádřit P-cadherinu a často P63.

Existují podobnosti mezi „bazální“ rakovina prsu a rakovin, které jsou detekovány u žen s BRCA1 mutací.

EGFR je vyjádřena často v „bazální“ nádorů tak u pacientů s těmito nádory mohou být přínosem v léčbě inhibitory EGFR.

IHC markery proliferace (nádor rychlost růstu)

Počet nebo procento mitotických buněk v mitóze, byl dlouho považován za morfologické „biomarker“ zhoubného nádoru. Existuje celá řada značek IHC, které vykazují proliferační aktivitu buněk (počet mitóz):

• Ki67 - antigen, který je exprimován v jádrech buněk ve všech fázích buněčného cyklu a je užitečný marker buněčné proliferace;
• MIB1 - protilátka, která reaguje s Ki-67 v tkáni, nebo formalinem fixovaných parafin;
• PPh3.

IHC markery apoptózy

Apoptóza, nebo ‚programovaná buněčná sebevražda„je biomarkerů agresivních nádorů. apoptotické proteiny mohou být identifikovány pomocí IHC:

• Bcl-2;
• Bax;
• Bcl-X.

Ostatní „výhledová“ markery

• p53. Mutace v tumor supresorového genu p53 (TP53) detekován v 20-30% případů karcinomu prsu. Tyto genové mutace jsou častější u žen s hereditární syndromy karcinomu prsu než ženy se sporadickou rakovinou. U pacientů s genetickou predispozicí k rakovině prsu může být doporučena testování p53. Detekce mutací p53 je také považován za možný prediktor odezvy karcinomu prsu na chemoterapii, ale detekce protein p53 imunohistochemicky nádoru, neodráží stav p53 mutací.
• Topoizomerázy II alfa. Jedná se o cíl, na který akce je zaměřena antracyklin - chemoterapeutická léčiva, která se často používá v léčbě karcinomu prsu.